Sự khác biệt giữa Forward và Reverse Primer
Share
Sự khác biệt chính - Chuyển tiếp vs mồi ngược
Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) là phương pháp khuếch đại DNA được sử dụng trong các ứng dụng sinh học phân tử. Đây là một kỹ thuật thường được sử dụng để tạo ra hàng triệu đến hàng tỷ bản sao của chuỗi DNA đặc biệt quan tâm. Nó là một trong ống nghiệm phương pháp thực hiện trong phòng thí nghiệm. Kỹ thuật PCR hoàn toàn phụ thuộc vào DNA polymerase được sản xuất thương mại có tên Taq polymerase. Và nó cũng đòi hỏi một số thành phần khác và bảo trì nhiệt độ thích hợp. Một thành phần quan trọng là mồi. Các đoạn mồi là các chuỗi DNA ngắn được thiết kế riêng cho chuỗi DNA đích. Chúng thường có chiều dài khoảng 20 nucleotide. Taq polymerase xúc tác cho việc thêm các nucleotide vào trình tự nucleotide có từ trước. Do đó, mồi được phục vụ như là điểm khởi đầu của quá trình tổng hợp các chuỗi mới. Taq polymerase chỉ hoạt động theo hướng 5 'đến 3' do đó quá trình tổng hợp DNA xảy ra theo cùng hướng 5 'đến 3'. Vì DNA là chuỗi kép, hai loại mồi là cần thiết trong PCR. Chúng được gọi là mồi chuyển tiếp và mồi ngược. Các mồi tiến và đảo ngược được gọi là dựa trên hướng kéo dài của mồi trong DNA khi quá trình tổng hợp DNA xảy ra. Chuyển tiếp mồi ủ với chuỗi DNA antisense và bắt đầu tổng hợp chuỗi + ve của gen theo hướng 5 'đến 3'. Reverse primer ủ với chuỗi cảm giác và bắt đầu tổng hợp chuỗi bổ sung của chuỗi mã hóa; đó là - đưa chuỗi gen vào hướng 5'to 3 '. Đây là sự khác biệt chính giữa mồi tiến và đảo ngược.
NỘI DUNG
1. Tổng quan và sự khác biệt chính
2. Primer chuyển tiếp là gì
3. Sơn lót ngược là gì
4. Điểm tương đồng giữa Forward và Reverse Primer
5. So sánh cạnh nhau - Chuyển tiếp so với Primer ngược ở dạng bảng
6. Tóm tắt
Primer chuyển tiếp là gì?
Định hướng chuyển tiếp là sự tổng hợp của chuỗi mã hóa hoặc chuỗi cảm giác của gen. Taq polymerase xúc tác sự tổng hợp của một chuỗi mới theo hướng 5 'đến 3'. Sự tổng hợp của chuỗi mã hóa xảy ra khi mồi bắt đầu với chuỗi không mã hóa hoặc chuỗi antisense và kéo dài theo hướng 5 'đến 3'.
Hình 01: Chuyển tiếp và đảo ngược mồi
Đoạn mồi kết hợp với chuỗi antisense hoặc chuỗi không mã hóa hoặc chuỗi mẫu được gọi là đoạn mồi trước vì đoạn mồi tiến hành đóng vai trò là điểm khởi đầu cho quá trình tổng hợp mã hóa hoặc chuỗi dương của gen. Chuyển tiếp mồi có một chuỗi nucleotide ngắn bổ sung cho đầu 3 cạnh của sợi antisense. Nó lai với chuỗi antisense và tạo điều kiện cho Taq polymerase thêm các nucleotide bổ sung cho chuỗi mẫu.
Đảo ngược là gì?
Reverse primer là chuỗi DNA ngắn ủ với đầu 3 'của chuỗi cảm giác hoặc chuỗi mã hóa. Reverse primer đóng vai trò là điểm khởi đầu để tổng hợp một chuỗi bổ sung của chuỗi mã hóa hoặc chuỗi không mã hóa. Reverse primer được thiết kế bổ sung cho đầu 3 'của chuỗi mã hóa. Do đó, nó ủ với đầu 3 'của chuỗi mã hóa và cho phép Taq polymerase tổng hợp chuỗi antisense hoặc chuỗi mẫu. Vì hướng của nó là theo chiều ngược lại, lớp sơn lót này được dán nhãn là lớp sơn lót ngược.
Cả hai đoạn mồi đảo ngược và chuyển tiếp đều quan trọng để tạo ra hàng triệu đến hàng tỷ bản sao của các vùng DNA cụ thể được nhắm mục tiêu hoặc quan tâm.
Điểm tương đồng giữa Forward và Reverse Primer là gì?
- Cả hai mồi chuyển tiếp và đảo ngược được làm từ oligonucleotide.
- Cả hai mồi chuyển tiếp và đảo ngược đều có chuỗi nucleotide ngắn bổ sung cho các đầu sườn của chuỗi kép DNA.
- Cả hai mồi Forward và Reverse thường bao gồm 20 nucleotide.
- Cả hai mồi chuyển tiếp và đảo ngược được sử dụng trong các phản ứng chuỗi polymerase.
- Cả hai mồi chuyển tiếp và đảo ngược được tổng hợp thương mại.
- Cả hai mồi Forward và Reverse đều ổn định nhiệt độ và chúng thường có Tm tương tự.
- Cả hai mồi chuyển tiếp và đảo ngược đều được ủ với các chuỗi DNA đích.
- Cả hai mồi chuyển tiếp và đảo ngược được thiết kế theo các phản ứng PCR.
- Cả hai mồi chuyển tiếp và đảo ngược được phục vụ như là điểm khởi đầu cho quá trình khuếch đại DNA.
- Cả hai đoạn mồi đảo ngược và chuyển tiếp đều quan trọng để tạo ra hàng triệu bản sao của các chuỗi DNA được nhắm mục tiêu hoặc quan tâm.
Sự khác biệt giữa Forward và Reverse Primer là gì?
Chuyển tiếp Primer vs Reverse Primer | |
| Chuyển tiếp mồi là chuỗi DNA ngắn lai với đầu 3 'không mã hóa hoặc chuỗi mẫu của gen và đóng vai trò là điểm khởi đầu để tổng hợp chuỗi mã hóa. | Reverse primer là chuỗi DNA ngắn lai với đầu 3 'của mã hóa hoặc chuỗi không mã hóa và đóng vai trò là điểm khởi đầu để tổng hợp chuỗi không mã hóa. |
| Sợi ủ | |
| Chuyển tiếp mồi ủ với sợi mẫu. | Đảo ngược mồi với sợi không nememplate. |
| Kết quả trình tự mới | |
| Chuyển tiếp mồi tạo điều kiện cho việc tổng hợp chuỗi mã hóa. | Reverse primer tạo điều kiện cho sự tổng hợp của chuỗi không mã hóa. |
Tóm tắt - Chuyển tiếp vs mồi ngược
Có hai loại mồi liên quan đến kỹ thuật PCR. Chúng là mồi tiến và đảo ngược. Dựa trên độ giãn dài của mồi trong tổng hợp chuỗi DNA mới, các mồi này được dán nhãn hoặc đặt tên. Taq polymerase tổng hợp DNA mới theo hướng 5 'đến 3'. Do đó, mồi được thiết kế bổ sung cho 3 'đầu sợi đôi. Chuyển tiếp mồi kéo dài theo hướng 5 'đến 3' lai với đầu 3 'của antisense hoặc mẫu hoặc chuỗi không mã hóa. Nó phục vụ như là điểm khởi đầu để tổng hợp chuỗi mã hóa. Đảo ngược mồi kéo dài theo hướng 5 'đến 3' lai với đầu 3 'của mã hóa hoặc không nhận dạng hoặc chuỗi cảm giác. Nó phục vụ như là điểm khởi đầu để tổng hợp chuỗi không mã hóa. Đây là sự khác biệt giữa mồi tiến và đảo ngược.
Tài liệu tham khảo:
1. Prim Primer (Sinh học phân tử). Wikipedia, Wikimedia Foundation, ngày 20 tháng 2 năm 2018. Có sẵn tại đây
2. Phản ứng chuỗi polymerase (PCR). Học viện Khan. Có sẵn ở đây
Hình ảnh lịch sự:
1.'Primers RevComp Melted2'By Richard Wheeler (Zephyris) - Công việc riêng, (CC BY-SA 3.0) qua Commons Wikimedia
