Sự khác biệt giữa miền Bắc miền Nam và miền Tây

Sự khác biệt chính - Bắc vs Nam vs Phương Tây
 

Phát hiện các chuỗi cụ thể của DNA, RNA và protein là điều cần thiết cho các loại nghiên cứu khác nhau trong sinh học phân tử. Điện di trên gel là một kỹ thuật phân tách DNA, RNA và protein theo kích thước của chúng. Từ các cấu hình gel, trình tự DNA cụ thể, trình tự RNA hoặc protein được phát hiện bằng các kỹ thuật đặc biệt gọi là làm mờ và lai với các đầu dò được dán nhãn. Có ba loại phương pháp làm mờ khác nhau là phương nam, phương bắc và phương tây. Sự khác biệt chính giữa vết rạn phía bắc phía nam và phía tây nằm ở loại phân tử mà nó phát hiện được từ một mẫu. Phương pháp làm mờ miền Nam là phương pháp phát hiện trình tự DNA cụ thể từ mẫu DNA. Làm mờ phía bắc là một kỹ thuật phát hiện chuỗi RNA cụ thể từ mẫu RNA. Phương pháp làm mờ phương Tây là phương pháp phát hiện một loại protein cụ thể từ mẫu protein.

NỘI DUNG
1. Tổng quan và sự khác biệt chính
2. Mờ Nam là gì
3. Phương Bắc là gì
4. Western Blot là gì
5. So sánh bên cạnh - Bắc so với Nam và phương Tây
6. Tóm tắt

Nam đốm là gì?

Kỹ thuật làm mờ miền Nam được phát triển bởi E. M. Southern vào năm 1975 để xác định trình tự DNA cụ thể từ mẫu DNA. Đây là kỹ thuật làm mờ đầu tiên được giới thiệu trong sinh học phân tử. Nó cho phép phát hiện các gen cụ thể từ DNA, các đoạn cụ thể từ DNA, v.v ... Có một số bước liên quan đến kỹ thuật làm mờ phía Nam. Họ là như sau.

1. DNA được phân lập từ mẫu và được tiêu hóa với endonuclease hạn chế.
2. Mẫu tiêu hóa được phân tách bằng điện di gel Agarose.
3. Các đoạn DNA trong gel bị biến tính thành các sợi đơn bằng cách sử dụng dung dịch kiềm.
4. DNA sợi đơn được chuyển đến màng lọc nitrocellulose bằng cách chuyển mao quản.
5. DNA chuyển được cố định vào màng vĩnh viễn.
6. DNA cố định trên màng được lai với các đầu dò có nhãn.
7. DNA không liên kết được rửa sạch khỏi màng bằng cách rửa.
8. Phim X-quang được tiếp xúc với màng và chế độ tự động được chuẩn bị.

Nam đốm được áp dụng cho các khía cạnh khác nhau của sinh học phân tử. Nó rất hữu ích trong lập bản đồ RFLP, nghiên cứu pháp y, methyl hóa DNA trong biểu hiện gen, phát hiện gen đột biến trong rối loạn di truyền, dấu vân tay DNA, v.v..

Hình 01: Kỹ thuật làm mờ vết rộp phía Nam

Bắc đốm là gì?

Phương pháp làm mờ phương bắc là phương pháp được thiết kế để phát hiện trình tự RNA hoặc trình tự mRNA cụ thể từ mẫu để nghiên cứu biểu hiện gen. Kỹ thuật này được phát triển bởi Alwine, Kemp và Stark vào năm 1979. Nó khác với các kỹ thuật làm mờ vết rạn da và phương Tây do một số bước. Tuy nhiên, kỹ thuật này cũng được thực hiện thông qua điện di gel, làm mờ và lai với các đầu dò và phát hiện được dán nhãn cụ thể. Kỹ thuật làm mờ phía bắc được thực hiện như sau.

1. RNA được chiết xuất từ ​​mẫu và phân tách bằng điện di gel.
2. RNA được chuyển từ gel lên màng thấm và cố định.
3. Màng được xử lý bằng đầu dò có nhãn được điều chế từ cDNA hoặc RNA (đầu dò bổ sung cho một chuỗi cụ thể trong mẫu).
4. Đầu dò được ủ với màng để liên kết với một trình tự cụ thể.
5. Các đầu dò không liên kết được rửa sạch.
6. Các mảnh lai ghép được phát hiện bằng máy chạy tự động.

Làm mờ phía bắc là một công cụ quan trọng trong việc phát hiện và định lượng mRNA lai, nghiên cứu sự thoái biến RNA, đánh giá thời gian bán hủy của RNA, phát hiện sự tách RNA, nghiên cứu biểu hiện gen, v.v..

Hình 02: Mờ Bắc

Western Bleash là gì?

Phương Tây làm mờ vết thương là phương pháp phát hiện một loại protein cụ thể từ hỗn hợp protein bằng cách sử dụng kháng thể có nhãn. Do đó, Western blot còn được gọi là immunoblot. Kỹ thuật này được giới thiệu bởi Towbin et al vào năm 1979 và hiện được thực hiện thường xuyên trong phòng thí nghiệm để phân tích protein. Các bước như sau.

1. Protein được chiết xuất từ ​​mẫu
2. Protein được phân tách bằng kích thước của chúng bằng cách sử dụng điện di gel polyacrylamide
3. Các phân tử được tách ra được chuyển vào màng PVDF hoặc màng nitrocellulose bằng cách điện hóa
4. Màng được chặn để liên kết không đặc hiệu với các kháng thể
5. Protein chuyển được liên kết với kháng thể chính (kháng thể có nhãn enzyme).
6. Màng được rửa để loại bỏ các kháng thể nguyên phát liên kết không đặc hiệu
7. Kháng thể giới hạn được phát hiện bằng cách thêm chất nền và phát hiện kết tủa màu được hình thành

Phương pháp làm mờ phương Tây rất hữu ích trong việc phát hiện các kháng thể chống HIV trong mẫu huyết thanh người. Western blot cũng có thể được sử dụng như một xét nghiệm xác nhận nhiễm trùng Viêm gan B và xét nghiệm xác định bệnh bò điên.

Hình 03: Phương Tây

Sự khác biệt giữa miền Bắc miền Nam và miền Tây?

Miền Bắc vs Miền Nam vs Miền Tây
Loại phân tử được phát hiện
Bắc đốm	Làm mờ phía bắc phát hiện một chuỗi RNA cụ thể từ một mẫu RNA.
Nam đốm	Rò rỉ miền Nam phát hiện một chuỗi DNA cụ thể từ mẫu DNA.
Tây phương	Western blarks phát hiện một loại protein cụ thể từ một mẫu protein.
Loại gel
Bắc đốm	Điều này sử dụng gel Agarose / formaldehyd.
Nam đốm	Cái này sử dụng gel Agarose.
Tây phương	Điều này sử dụng gel Polyacrylamide.
Phương pháp làm mờ
Bắc đốm	Đây là một sự chuyển mao quản.
Nam đốm	Đây là một sự chuyển mao quản.
Tây phương	Đây là một chuyển điện.
Thăm dò sử dụng
Bắc đốm	Các đầu dò cDNA hoặc RNA được dán nhãn phóng xạ hoặc không phóng xạ.
Nam đốm	Các đầu dò DNA được dán nhãn phóng xạ hoặc không phóng xạ.
Tây phương	Kháng thể chính được sử dụng làm đầu dò.
Hệ thống phát hiện
Bắc đốm	Điều này được thực hiện bằng cách sử dụng ký tự ghi hoặc phát hiện ánh sáng hoặc thay đổi màu sắc.
Nam đốm	Điều này được thực hiện bằng cách sử dụng ký tự ghi, phát hiện ánh sáng hoặc thay đổi màu sắc.
Tây phương	Điều này được thực hiện bằng cách sử dụng phát hiện ánh sáng hoặc thay đổi màu sắc.

Tóm tắt - Miền Bắc vs Miền Nam vs Miền Tây

Làm mờ là một kỹ thuật đặc biệt được phát triển để xác định DNA, RNA hoặc protein cụ thể từ các mẫu. Có ba quy trình làm mờ riêng biệt, đó là phía bắc, phía nam và phía tây, để phát hiện một loại phân tử cụ thể. Kỹ thuật làm mờ phương Bắc được thiết kế để phát hiện chuỗi RNA cụ thể từ hỗn hợp RNA. Kỹ thuật làm mờ phương Nam cho phép phát hiện trình tự DNA cụ thể từ mẫu DNA và kỹ thuật làm mờ phương Tây được phát triển để xác định một loại protein cụ thể từ hỗn hợp protein.

Người giới thiệu
1. Vượn, Janay. Việt Tây Blot: Tổng quan về chuyển protein. Tạp chí khoa học y tế Bắc Mỹ. Medledge Publications & Media Pvt Ltd, tháng 3 năm 2014. Web. 27 tháng 3 năm 2017
2. Brown, T. vang Nam đốm. Các giao thức hiện tại trong miễn dịch học. Thư viện Y khoa Quốc gia Hoa Kỳ, tháng 5 năm 2001. Web. 27 tháng 3 năm 2017
3. Ông, Shan L. hung Bắc blot. Các phương pháp trong enzyme. Thư viện Y khoa Quốc gia Hoa Kỳ, 2013. Web. 27 tháng 3 năm 2017

Hình ảnh lịch sự:
1. Đề án Bắc Blot miền Bắc theo RNA405 - Công việc riêng (Miền công cộng) qua Commons Wikimedia
2. miền Tây blot 114A Xuất bởi Amanthabagdon - Công việc riêng (Miền công cộng) qua Commons Wikimedia