Sự khác biệt giữa RAPD và RFLP

Sự khác biệt chính - RAPD so với RFLP
 

Các dấu hiệu di truyền được sử dụng trong Sinh học phân tử để xác định các biến thể di truyền giữa các cá thể và loài. DNA đa hình khuếch đại ngẫu nhiên (RAPD) và Hạn chế đoạn dài đa hình (RFLP) là hai dấu phân tử quan trọng được sử dụng thường xuyên trong các phòng thí nghiệm. RAPD được thực hiện với các mồi oligonucleotide ngắn và tùy ý, và nó dựa trên sự khuếch đại ngẫu nhiên của nhiều vị trí trong suốt DNA mẫu của sinh vật. RFLP được thực hiện với một endonuclease hạn chế cụ thể, và nó dựa trên tính đa hình của các đoạn giới hạn kết quả và lai tạo. Sự khác biệt chính giữa RAPL và RFLP là RAPD là một loại kỹ thuật PCR được thực hiện mà không có kiến ​​thức trình tự trước trong khi RFLP không liên quan đến PCR và đòi hỏi kiến ​​thức trình tự trước để thực hiện kỹ thuật.

NỘI DUNG
1. Tổng quan và sự khác biệt chính
2. RAPD là gì
3. RFLP là gì
4. So sánh cạnh nhau - RAPD vs RFLP
5. Tóm tắt

RAPD là gì?

RAPD là một dấu hiệu phân tử hữu ích trong sinh học phân tử. Đó là một kỹ thuật nhanh chóng và dễ dàng. RAPD có thể được định nghĩa là một phương pháp dẫn đến các chuỗi DNA đa hình là kết quả của sự khuếch đại ngẫu nhiên của nhiều vị trí của mẫu DNA đích. RAPD sử dụng các mồi oligonucleotide ngắn với các chuỗi tùy ý để khuếch đại PCR. Mồi được tổng hợp nhân tạo mà không có kiến ​​thức trình tự trước. Do đó, nó được coi là một kỹ thuật dễ dàng và hữu ích.

Các bước chính sau đây có liên quan đến RAPD.

1. Trích xuất DNA đích
2. Khuếch đại nhiều vị trí của DNA đích bằng cách sử dụng các đoạn mồi được chọn ngẫu nhiên
3. Điện di gel của các sản phẩm PCR khuếch đại
4. Nhuộm bằng ethidium bromide và xác định tính đa hình

Là kết quả của sự biến đổi trong quá trình ủ mồi, các mảnh khác nhau với độ dài khác nhau được tạo ra trong quá trình khuếch đại. Do đó, mô hình dải trên gel là khác nhau giữa các cá nhân và loài. Do đó, RAPD cho phép phát hiện biến thể di truyền giữa các sinh vật trong việc xác định và phân biệt.

RAPD được áp dụng trong các nghiên cứu khác nhau về sinh học phân tử như xác định sự khác biệt di truyền giữa các loài liên quan chặt chẽ, lập bản đồ gen, dấu vân tay DNA, xác định các bệnh di truyền, vv.

Hình 01: RAPD

RFLP là gì?

Giới hạn độ dài đoạn đa hình (RFLPs) là một dấu hiệu phân tử được sử dụng trong sinh học phân tử để xác định biến đổi di truyền trong trình tự DNA tương đồng. Đây là dấu hiệu di truyền đầu tiên được phát triển cho dấu vân tay DNA. Tất cả các sinh vật tạo ra hồ sơ DNA duy nhất khi bị hạn chế với các enzyme hạn chế cụ thể. RFLP đóng vai trò là một công cụ quan trọng trong việc tạo ra các cấu hình DNA duy nhất của các cá nhân và phát hiện biến thể di truyền giữa chúng. Khi các mẫu DNA được tiêu hóa với các endonuclease hạn chế cụ thể, nó mang lại các cấu hình DNA khác nhau, duy nhất cho mỗi cá nhân. Do đó, nguyên tắc chính của phương pháp này là phát hiện biến dị di truyền giữa các sinh vật bằng cách hạn chế DNA tương đồng với các enzyme cắt giới hạn cụ thể và phân tích đa hình chiều dài đoạn thông qua điện di gel và làm mờ. Các mẫu đốm là duy nhất cho mỗi sinh vật và đặc trưng cho các kiểu gen cụ thể.

Các bước sau đây có liên quan đến RFLP.

1. Phân lập đủ số lượng DNA từ các mẫu
2. Sự phân mảnh của các mẫu DNA với các endonuclease giới hạn cụ thể thành chuỗi ngắn
3. Tách các mảnh kết quả với độ dài khác nhau bằng điện di trên gel agarose.
4. Chuyển hồ sơ gel vào một màng bằng cách Nam đốm
5. Lai tạo màng với các đầu dò có nhãn và phân tích tính đa hình chiều dài đoạn trong mỗi hồ sơ

RFLP có nhiều ứng dụng khác nhau như chẩn đoán bệnh di truyền, lập bản đồ gen, xác định tội phạm trong nghiên cứu pháp y, xét nghiệm quan hệ cha con, v.v..

Hình 02: Kiểu gen RFLP

Sự khác biệt giữa RAPD và RFLP là gì?

RAPD vs RFLP
RAPD là một dấu hiệu phân tử dựa trên các mồi ngẫu nhiên và PCR.	RFLP là một dấu hiệu phân tử dựa trên việc sản xuất các đoạn giới hạn độ dài khác nhau.
Mẫu bắt buộc
Các mẫu DNA nhỏ là đủ để phân tích RAPD.	Cần một lượng lớn mẫu DNA chiết xuất để phân tích RFLP.
Thời gian
RAPD là một quá trình nhanh chóng.	RFLP là một quá trình tốn thời gian.
Sử dụng mồi
Các mồi ngẫu nhiên được sử dụng và các mồi giống nhau có thể được sử dụng cho các loài khác nhau.	Các đầu dò đặc trưng cho loài được sử dụng trong RFLP để lai.
độ tin cậy
Độ tin cậy của kỹ thuật ít hơn so với RFLP.	RFLP là một kỹ thuật đáng tin cậy.
Làm mờ
RAPD liên quan đến vết rộp phía Nam.	Rò rỉ miền Nam là một bước của RFLP.
Phát hiện biến thể Allelic
Các biến thể allelic không thể được phát hiện bởi RAPD.	Các biến thể allelic có thể được phát hiện bởi RFLP.
Cần kiến ​​thức về trình tự
RAPD không yêu cầu kiến ​​thức trình tự trước.	Kiến thức trình tự trước là cần thiết để thiết kế thăm dò.
PCR
PCR có liên quan đến RAPD	PCR không liên quan đến RFLP.
Khả năng tái lập
RAPD có độ tái lập thấp	RFLP có độ tái lập cao so với RAPD.

Tóm tắt - RAPD vs RFLP

RAPD và RFLP là các dấu hiệu quan trọng được sử dụng trong sinh học phân tử. Cả hai phương pháp đều có khả năng phát hiện biến dị di truyền giữa các sinh vật. RAPD được thực hiện bằng cách sử dụng các đoạn mồi ngẫu nhiên. RFLP được thực hiện bằng cách sử dụng các enzyme hạn chế cụ thể. Cả hai phương pháp tạo ra hồ sơ DNA duy nhất cho từng sinh vật. RAPD có liên quan đến vài bước so với RFLP. Nhưng nó tạo ra kết quả kém tin cậy và tái sản xuất hơn RFLP. Đây là sự khác biệt chính giữa RAPD và RFLP.

Người giới thiệu:
1. Dos, J. B., J. Nienhuis, P. Skroch, J. Tivang và M. K. Slocum. Sự so sánh giữa các dấu hiệu di truyền RAPD và RFLP trong việc xác định sự giống nhau về di truyền giữa các kiểu gen của Brassica oleracea L. NHÃN. Lý thuyết và ứng dụng di truyền học. Theoretische und angewandte Genetik. Thư viện Y khoa Quốc gia Hoa Kỳ, tháng 3 năm 1994. Web. Ngày 12 tháng 4 năm 2017
2. Powell, Wayne, Michele Morgante, Chaz Andre, Michael Hanafey, Julie Vogel, Scott Tingey, và Antoni Rafalski. Sự so sánh của RFLP, RAPD, AFLP

Hình ảnh lịch sự:
1. Kiểu gen RFLP của Bố By (chưa biết) - Viện sức khỏe quốc gia (Tên miền công cộng) thông qua Commons Wikimedia