Sự khác biệt giữa thử nóng và lạnh
Share
Sự khác biệt chính - Ấm áp vs Lạnh Cố gắng
Trypsinization ấm và lạnh là hai phương pháp được sử dụng trong phân tổ enzyme của các tế bào trong nuôi cấy tế bào động vật. Các sự khác biệt chính giữa trypsinization ấm và lạnh, như tên gọi, phụ thuộc vào nhiệt độ mà trypsin được thêm vào để phân chia tế bào. Sự cố gắng ấm áp diễn ra trong điều kiện nhiệt độ cao hơn (36,5 - 37 0C) trong khi quá trình cố gắng lạnh diễn ra trong điều kiện nhiệt độ thấp.
Trong quá trình nuôi cấy tế bào sơ cấp của tế bào động vật, có ba phương pháp chính được sử dụng và đã được chứng minh là thành công. Ba phương pháp bao gồm phân tổ cơ học các tế bào, phân tổ enzyme của các tế bào và kỹ thuật thám hiểm chính. Sự phân tổ enzyme của các tế bào dẫn đến sự phân lập tế bào và nó được thực hiện bởi enzyme trypsin phân giải protein. Do đó, quá trình này được gọi là Trypsinization. Trypsinization có thể được thực hiện trong hai điều kiện khác nhau là Trypsinization ấm và Trypsinization lạnh. Cố gắng ấm là phương pháp xử lý tế bào bằng trypsin trong điều kiện ấm ở nhiệt độ 36,5 - 37 0C. Cố gắng lạnh là quá trình xử lý trypsin diễn ra trong điều kiện lạnh hơn, tốt nhất là trong nước đá duy trì nhiệt độ rất thấp.
NỘI DUNG
1. Tổng quan và sự khác biệt chính
2. Cố gắng ấm áp là gì
3. Cố gắng lạnh là gì
4. Điểm tương đồng giữa sự cố gắng ấm và lạnh
5. So sánh bên cạnh - Thử nóng và lạnh ở dạng bảng
6. Tóm tắt
Cố gắng ấm áp là gì?
Cố gắng có thể được thực hiện để phân tách các thành phần tế bào để cô lập các tế bào để tạo ra một tế bào nuôi cấy chính. Trypsin là một enzyme phân hủy protein và hỗn hợp enzyme được sử dụng trong quá trình trypsin hóa có thể là một chiết xuất thô hoặc một sản phẩm tinh khiết. Chiết xuất thô được cho là hiệu quả hơn trong việc ly giải protein và phân rã tế bào vì nó có chứa các enzyme thoái hóa khác.
Cố gắng ấm là phương pháp enzyme được sử dụng phổ biến nhất để phân tổ tế bào diễn ra trong điều kiện nhiệt độ cao hơn. Trước khi điều trị bằng cách thử, mô mong muốn được cắt thành các mảnh nhỏ hơn. Nó tạo điều kiện cho quá trình phân tổ dễ dàng. Các mô được cắt nhỏ sau đó được rửa trong một môi trường đặc biệt được gọi là môi trường muối bóc tách.
Sau khi hoàn thành bước rửa, các tế bào được chuyển thành bình chứa enzyme hoạt động, đó là trypsin. Vì kỹ thuật này ngụ ý một giao thức trypsinization ấm, trypsin được đặt ở nhiệt độ khoảng 37 0C trong khoảng bốn giờ.
Hình 01: Trypsin
Các nội dung được trộn và khuấy trộn bằng cách sử dụng các phương pháp ly tâm để dễ dàng cho giao thức và tăng tốc quá trình phân tổ. Sau khi đạt được thời gian khuyến nghị, các tế bào có thể được lấy từ phần nổi phía trên. Các tế bào có nguồn gốc từ chất nổi trên bề mặt sau đó được ủ ở nhiệt độ và thời gian cụ thể.
Cố gắng lạnh là gì?
Trypsinization lạnh là loại trypsinization khác diễn ra trong điều kiện lạnh. Trong kỹ thuật này, các tế bào được cắt nhỏ và rửa sạch được đặt trong lọ trên băng và sau đó được ngâm với trypsin. Thời gian ngâm lâu hơn nhiều - khoảng 6 - 24 giờ.
Sau khi hoàn thành quy trình ngâm, trypsin được lấy ra khỏi lysate của tế bào và các mảnh mô được tiếp tục ủ ở 37 0C trong khoảng 20 - 30 phút. Sự phân tổ của các tế bào được tạo ra bằng cách trộn lặp lại hỗn hợp mô. Điều này sẽ cho phép các tế bào phân tách khỏi màng và đi đến bề mặt. Khi các tế bào ở trên bề mặt, chúng được ủ và phát triển ở nhiệt độ và thời gian mong muốn.
Phương pháp trypsinization lạnh có một số lợi thế
- Năng suất cao hơn của các tế bào khả thi khi tổn thương tế bào được giảm thiểu. Thiệt hại tế bào được giảm thiểu bằng cách không sử dụng các bước ly tâm.
- Phương pháp rất thuận tiện.
- Ít tốn công sức.
Hạn chế chính của phương pháp thử lạnh là số lượng lớn không thể được sử dụng trong một trường hợp.
Điểm giống nhau giữa sự cố gắng ấm và lạnh?
- Cả hai quá trình Trypsin hóa ấm và lạnh đều sử dụng enzyme trypsin để phân tổ các tế bào.
- Cả hai quá trình Trypsinization ấm và lạnh đều được sử dụng trong quy trình nuôi cấy tế bào để phân tổ các tế bào.
- Trong cả hai quy trình điều trị Trypsinization ấm và lạnh, các tế bào được lấy từ chất nổi trên bề mặt.
Sự khác biệt giữa thử nóng và lạnh?
Ấm áp và lạnh | |
| Cố gắng ấm là phương pháp xử lý tế bào bằng trypsin trong điều kiện ấm ở nhiệt độ 36,5 - 37 0. | Cố gắng lạnh là quá trình xử lý trypsin diễn ra trong điều kiện lạnh hơn tốt nhất là trong nước đá duy trì nhiệt độ rất thấp. |
| Giao thức | |
| Các mảnh mô cắt nhỏ được duy trì ở 37 0C liên tục trong suốt quá trình. | Các mảnh mô cắt nhỏ ban đầu được duy trì ở nhiệt độ lạnh như băng và sau đó được duy trì ở mức 37 0. |
| Nhiệt độ | |
| Cố gắng ấm xảy ra ở 36,5 - 37 0 | Cố gắng lạnh xảy ra ở nhiệt độ lạnh băng. |
| Thời gian tiêu thụ | |
| Cần ít thời gian hơn cho toàn bộ quá trình (khoảng 4 giờ) quá trình thử nóng. | Thời gian dài hơn (khoảng 6 - 24 giờ) để thử lạnh. |
| Năng suất của các tế bào khả thi | |
| Ít cố gắng ấm. | Cố gắng lạnh cao. |
| Sử dụng máy ly tâm | |
| Ly tâm là cần thiết để phân tổ các tế bào trong quá trình cố gắng ấm. | Không cần ly tâm trong quá trình thử lạnh. |
| Số lượng mô ban đầu cho quá trình cố gắng | |
| Một số lượng lớn hơn của mô có thể được sử dụng trong trypsinization ấm. | Một số lượng nhỏ hơn của mô có thể được sử dụng trong trypsinization lạnh. |
| Thiệt hại tế bào | |
| Cao do ly tâm trong cố gắng ấm áp. | Ít hơn do cố gắng lạnh. |
Tóm lược - Ấm áp vs Lạnh Cố gắng
Trypsinization là phương pháp sử dụng enzyme phân hủy protein trypsin để phân tổ và chuẩn bị nuôi cấy tế bào sơ cấp trong quá trình nuôi cấy tế bào. Có hai kỹ thuật cố gắng chính dựa trên nhiệt độ được sử dụng trong quy trình. Họ là cố gắng ấm áp và lạnh. Cố gắng ấm được thực hiện ở 37 0C trong khi cố gắng lạnh được thực hiện trong điều kiện lạnh băng. Mặc dù quá trình cố gắng lạnh mất nhiều thời gian hơn để hoàn thành, nó được cho là có năng suất cao hơn các tế bào khả thi. Điều này là do thực tế là tổn thương tế bào được giảm thiểu trong quá trình cố gắng lạnh vì nó không sử dụng các bước ly tâm mạnh mẽ. Đây là sự khác biệt giữa cố gắng ấm và lạnh.
Tài liệu tham khảo:
1. Cố gắng cố gắng. Cố gắng - Tổng quan | Khoa học Chủ đề trực tiếp. Có sẵn ở đây
2. Nuôi cấy tế bào sơ cấp: 3 kỹ thuật (có sơ đồ). Thảo luận Sinh học, ngày 16 tháng 10 năm 2015. Có sẵn tại đây
Hình ảnh lịch sự:
1.'Trypsin trang hoạt động'By Fdardel - Công việc riêng, (CC BY-SA 3.0) qua Commons Wikimedia
