Sự khác biệt giữa RT-PCR và QPCR

Phản ứng sao chép chuỗi polymerase ngược (RT-PCR)

RT-PCR so với QPCR

Những tiến bộ trong công nghệ sinh học đã dẫn đến việc phát hiện ra một số cách để đối phó với nhu cầu ghép tạng trong những năm qua. Trước đây, một cá nhân tự nguyện hiến tặng bất kỳ cơ quan nào ngay sau khi chết cho bệnh nhân có nhu cầu chỉ có thể bắt đầu phẫu thuật cấy ghép. Các nghiên cứu và nghiên cứu liên tục của các nhà sinh học dẫn đến việc phát hiện ra các tế bào gốc.

Các tế bào gốc đề cập đến những tế bào được lấy từ DNA của phôi, chúng sẽ đóng vai trò là nguồn tái tạo các tế bào về cơ bản sẽ là một bản sao của cơ quan nơi DNA đã được lấy. Trong khi các nhà hoạt động nhân quyền vận động để tạm dừng các thủ tục như vậy, các hoạt động thành công đã thực sự chứng minh tính hiệu quả của sự phát triển tế bào gốc trong cấy ghép nội tạng.

Tuy nhiên, trước khi người ta có thể đánh giá và hiểu đầy đủ về tế bào gốc, cần phải làm quen với các thuật ngữ khác nhau liên quan đến khám phá khoa học này. Nuôi cấy tế bào gốc liên quan đến DNA và mã hóa của nó. Vì vậy, điều quan trọng đối với sinh viên hoặc bất kỳ cá nhân nào quan tâm đến lĩnh vực này là phân biệt giữa RT-PCR và qPCR.

Phản ứng sao chép chuỗi polymerase ngược (RT-PCR) là một trong nhiều biến thể của phản ứng chuỗi polymerase hay còn gọi là PCR. Kỹ thuật phòng thí nghiệm này được sử dụng rộng rãi trong sinh học phân tử để các nhà khoa học tạo ra nhiều bản sao của trình tự DNA cụ thể thông qua một quá trình được đặt ra là khuếch đại. Sự khác biệt giữa RT-PCR và PCR truyền thống là RNA lần đầu tiên được phiên mã ngược thành bổ sung DNA của nó, sử dụng phiên mã ngược. DNA bổ sung mới chứa phiên mã đảo ngược sau đó sẽ được khuếch đại bằng cách sử dụng PCR truyền thống hoặc PCR thời gian thực.

Hầu hết các sinh viên nghiên cứu quá trình này thường mắc sai lầm khi hoán đổi PCR sao chép ngược và PCR thời gian thực vì hai từ này được viết tắt tương tự nhau. Để tránh nhầm lẫn, các nhà sinh học dán nhãn PCR thời gian thực là PCR thời gian thực định lượng hoặc qPCR.

QPCR khác rất nhiều so với RT-PCR, vì qPCR chịu trách nhiệm đo lường khuếch đại khi nó xảy ra. Có thể nói rằng RT-PCR bắt đầu quá trình khuếch đại, trong khi qPCR đo nó khi thủ tục diễn ra.

PCR định lượng thời gian thực

QPCR đã thực sự cách mạng hóa phương pháp tiếp cận một chiều truyền thống khi định lượng DNA và RNA, vì áp dụng phương pháp qPCR giúp các nhà sinh học có thể xác định nồng độ ban đầu của axit nuclei ngay cả trước khi kết quả phản ứng được quan sát và nhảy xuống.

Việc áp dụng qPCR, hiện được coi là kỹ thuật phân tích nhạy cảm và mạnh mẽ nhất cho các nghiên cứu di truyền, đã mở rộng đáng kể. Nó hiện đang tham gia vào phân tích biểu hiện gen định lượng, kiểu gen, phát hiện mầm bệnh và phân tích SNP, cùng với các phép đo can thiệp RNA.

QPCR thường được kết hợp với quá trình sao chép ngược để định lượng RNA thông tin và MicroRNA có trong các tế bào của các mô được quan sát và thử nghiệm. Điều này sau đó mang đến một sự khác biệt rõ ràng khác giữa hai loại: RT-PCR có thể được sử dụng cho quá trình khuếch đại, nhưng nó cần được hợp nhất với qPCR cho mục đích định lượng.

QPCR cũng được biết là định lượng nhiều hơn vì dữ liệu có thể được thu thập dưới dạng giai đoạn tăng trưởng theo cấp số nhân (log) của tiến trình PCR. Các nhà sinh học lưu ý rằng số lượng sản phẩm phụ của PCR tỷ lệ thuận với lượng axit nucleic mẫu sẽ được đo thông qua qPCR.

Mặt khác, RT-PCR không có bản chất định lượng vì việc tuân thủ cường độ của dải khuếch đại trên gel theo tiêu chuẩn nồng độ đã đặt có thể dẫn đến suy luận ra bán định lượng.

Tóm lược:

1.QPCR và RT-PCR đều là thuật ngữ được sử dụng trong công nghệ sinh học và được sử dụng để sản xuất nhiều bản sao DNA.
2.RT-PCR được sử dụng để khuếch đại phiên mã ngược của mã DNA; QPCR đo độ khuếch đại.
3.RT-PCR là để khuếch đại, còn qPCR là để định lượng.
4.QPCR có bản chất định lượng, trong khi RT-PCR thì không.