Sự khác biệt giữa Benzonase và DNase

Sự khác biệt chính - Benzonase vs DNase

Sự xuống cấp của axit nucleic rất quan trọng đối với nhiều kỹ thuật sinh học phân tử. Nó được sử dụng rộng rãi trong công nghệ DNA tái tổ hợp để loại bỏ các đoạn DNA và RNA không mong muốn. Enzyme phân giải axit nucleic được gọi là Nuclease, và chúng có thể thuộc các loại khác nhau dựa trên chức năng cần thiết. Các hạt nhân làm suy giảm DNA được gọi là DNase trong khi các hạt nhân làm suy giảm RNA được biết là RNase. Những enzyme này được sử dụng chủ yếu trong trong ống nghiệm thí nghiệm ở đâu trong ống nghiệm các xét nghiệm phân tử được thực hiện để phân lập DNA, RNA hoặc protein tinh khiết. Benzonase là một loại nuclease làm suy giảm cả DNA và RNA trong khi DNase chỉ làm suy giảm DNA. Đây là điểm khác biệt chính giữa Benzonase và DNase.

NỘI DUNG

1. Tổng quan và sự khác biệt chính
2. Benzonase là gì
3. DNase là gì
4. Điểm tương đồng giữa Benzonase và DNase
5. So sánh cạnh nhau - Benzonase vs DNase ở dạng bảng
6. Tóm tắt

Benzonase là gì?

Benzonase là một endonuclease biến đổi gen từ Serratia marcescens. Enzyme này được sản xuất trong E coli máy chủ ở quy mô công nghiệp. Benzonase có khả năng phân tách DNA chuỗi kép, DNA tuyến tính, DNA vòng tròn và RNA chuỗi đơn. Do đó, Benzonase rất quan trọng về mặt thương mại. Enzyme Benzonase là một dimer protein có 245 axit amin giống nhau, tiểu đơn vị ~ 30 kDa với hai liên kết disulfide thiết yếu. Benzonase phân cắt axit nucleic ở đầu 5 'và tạo thành các mảnh với 5'ends miễn phí. Benzonase có thể phân cắt axit nucleic ở bất kỳ trình tự nào nhưng thích các vùng giàu GC.

Benzonase được lưu trữ ở -20 ⁰C. Độ pH tối ưu cho hoạt động của enzyme được tìm thấy là 8,0 - 9,2. Các ứng dụng của Benzonase bao gồm chuẩn bị mẫu cho điện di gel 2D trong đó Benzonase loại bỏ axit nucleic liên kết và loại bỏ các chất gây ô nhiễm axit nucleic khỏi các chế phẩm protein tái tổ hợp. Nó cũng được sử dụng để làm giảm độ nhớt của chiết xuất protein và ngăn ngừa sự đóng cục của các tế bào trong hỗn hợp tế bào.

DNase là gì?

DNase là một loại enzyme thủy phân nuclease, chỉ có khả năng phân cắt DNA sợi đôi. Có hai loại DNase chính: DNase I và DNase II. DNase I tham gia tách DNA sợi kép để tạo ra polynucleotide với 5 'đầu tự do. DNase II có liên quan đến việc tách DNA sợi đôi để tạo ra chuỗi polynucleotide với 3 'đầu tự do hoặc nhô ra.

DNase tôi

Chức năng DNase I ở độ pH tối ưu trong khoảng từ 7,0 - 8,0. Hoạt tính của enzyme phụ thuộc vào nhiều đồng yếu tố ion bao gồm Ca²⁺, Mg²⁺ hoặc Mn²⁺. Hoạt động của Mg²⁺ và Mn²⁺ quyết định chức năng của DNase I. Với sự có mặt của Mg²⁺, DNase tôi tách từng chuỗi của DSDNA một cách độc lập. Điều này diễn ra một cách ngẫu nhiên. Ngược lại, với sự có mặt của Mn^2+, enzyme cắt cả hai chuỗi DNA ở cùng một vị trí. Sự phân tách này sẽ dẫn đến việc tạo ra hai loại đoạn DNA; một loại có đầu cùn và một loại khác có một hoặc hai nucleotide nhô ra.

Hình 02: DNase

DNase II

Chức năng DNase II ở pH tối ưu 4,5-5,0 và các ion kim loại hóa trị hai được yêu cầu cho hoạt động của nó, tương tự như DNase I. Cơ chế của DNase II được biết bao gồm ba bước chính.

Nhiều đứt gãy đơn được tạo ra trong xương sống DNA.
Nucleotide hòa tan axit và oligonucleotide được sản xuất.
Sự thay đổi hyperchromic phi tuyến tính xảy ra trong giai đoạn cuối.

Các chất ức chế chính của enzyme DNase bao gồm các chất thải sắt, kim loại chuyển tiếp và các hóa chất như Natri dodecyl sulfate và β - mercaptoethanol.

Các ứng dụng chính của DNase bao gồm chuẩn bị chiết xuất RNA và chiết xuất protein không có DNA và loại bỏ DNA mẫu trong các thí nghiệm sao chép in vitro.

Điểm tương đồng giữa Benzonase và DNase là gì?

Cả hai đều là enzyme thủy phân.
Cả hai đều là hạt nhân.
Cả hai đều tham gia bằng cách cắt liên kết phosphodiester của axit nucleic.
Cả hai đều yêu cầu độ pH và nhiệt độ lưu trữ tối ưu để duy trì hoạt động của enzyme.
Các chất ức chế enzyme bao gồm các tác nhân chelat, kim loại chuyển tiếp và hóa chất tẩy rửa.
Các ứng dụng chủ yếu tập trung vào việc thu được các chiết xuất DNA, RNA và protein có độ tinh khiết cao.
Cả hai enzyme có thể được sản xuất thông qua kỹ thuật di truyền.

Sự khác biệt giữa Benzonase và DNase là gì?

Benzonase vs DNase
Benzonase là một loại enzyme có khả năng phân tách DNA sợi kép, DNA tuyến tính, DNA tròn và RNA.	DNase là một enzyme có khả năng phân cắt DNA sợi đôi.
Chất nền cho Enzyme
Cả DNA và RNA đều là cơ chất cho benzonase.	DNA là chất nền cho DNase.
Kết cấu
Phạm vi pH tối ưu của Benzonase là 7,0 -8,0	Phạm vi pH tối ưu của DNase I là 7,0 - 8,0 và DNase II là 4,5 - 5,0.

Tóm tắt - Benzonase vs DNase

Enzyme nuclease được sử dụng rộng rãi trong các quy trình thí nghiệm khác nhau liên quan đến sinh học phân tử và kỹ thuật di truyền. Benzonase và DNase là hai loại nuclease. Benzonase có liên quan đến việc làm suy giảm cả DNA và RNA trong khi DNase có liên quan đến việc tách DNA sợi kép. Đây là sự khác biệt cơ bản giữa benzonase và DNase. Hiện tại, cả hai loại nuclease này đều được sản xuất thông qua công nghệ DNA tái tổ hợp, tạo ra các enzyme chất lượng cao hơn được tối ưu hóa để sản xuất tối đa.

Tải xuống phiên bản PDF của Benzonase vs DNase

Bạn có thể tải xuống phiên bản PDF của bài viết này và sử dụng nó cho mục đích ngoại tuyến theo ghi chú trích dẫn. Vui lòng tải xuống phiên bản PDF tại đây Sự khác biệt giữa Benzonase và DNase

Người giới thiệu:

1. Rượu Deoxyribonuclease I từ tuyến tụy bò D5025. Sigma-Aldrich, Có sẵn ở đây. Truy cập ngày 19 tháng 9 năm 2017.
2. xông Deoxyribonuclease II. Deoxyribonuclease II - Hướng dẫn sử dụng Enzyme Worthington, Có sẵn tại đây. Truy cập ngày 19 tháng 9 năm 2017.

Hình ảnh lịch sự:

1. Trang web quá nhạy cảm với DNA DNA của Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, et al. - Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, et al. (2012) Mối tương quan giữa phân phối trang web quá nhạy cảm với DNase I và biểu hiện gen trong các tế bào HeLa S3. PLoS MỘT 7 (8): e42414. doi: 10.1371 / Tạp chí.pone.0042414 (CC BY-SA 2.5) qua Commons Wikimedia

Khoa học & Tự nhiên