Sự khác biệt giữa ELISA trực tiếp và gián tiếp

Sự khác biệt chính - ELISA trực tiếp và gián tiếp
 

Xét nghiệm miễn dịch liên kết với enzyme (ELISA), còn được gọi là xét nghiệm miễn dịch enzyme, là xét nghiệm huyết thanh học phát hiện các kháng thể trong máu. Nó được sử dụng như một công cụ chẩn đoán để tìm hiểu xem bệnh nhân đã tiếp xúc với một loại virus cụ thể hay một tác nhân truyền nhiễm khác (kháng nguyên) và liệu cơ thể có tạo ra kháng thể chống nhiễm trùng hay không. ELISA cũng có thể xác định các bệnh nhiễm trùng trong quá khứ và hiện tại. Do đó, ELISA thường được sử dụng như một xét nghiệm sàng lọc trước bởi các bác sĩ trước khi phân tích chuyên sâu về các bệnh. Xét nghiệm này có thể được thực hiện trong phòng thí nghiệm bằng cách lấy mẫu máu từ bệnh nhân. Có hai loại xét nghiệm ELISA: ELISA trực tiếp và ELISA gián tiếp. Sự khác biệt chính giữa ELISA trực tiếp và gián tiếp là ELISA gián tiếp nhạy hơn và cần thêm kháng thể thứ cấp trong khi ELISA trực tiếp ít nhạy cảm hơn và chỉ sử dụng một kháng thể chính.

NỘI DUNG
1. Tổng quan và sự khác biệt chính
2. ELISA trực tiếp là gì
3. ELISA gián tiếp là gì
4. So sánh cạnh nhau - ELISA trực tiếp và gián tiếp
5. Tóm tắt

ELISA trực tiếp là gì?

ELISA là một xét nghiệm chẩn đoán bệnh được thực hiện để xác định sự hiện diện của các kháng nguyên hoặc kháng thể cụ thể trong máu. Nó được thực hiện như một xét nghiệm tấm. Nó sử dụng các kháng thể liên kết với các enzyme dễ dàng thử nghiệm. Sự hiện diện của kháng nguyên trong mẫu huyết thanh liên kết với các kháng thể đặc hiệu liên kết với enzyme. Trong bước cuối cùng, một chất nền cụ thể được thêm vào để phản ứng với enzyme. Enzym chuyển đổi cơ chất thành một sản phẩm tạo màu hoặc tín hiệu. Sự thay đổi màu sắc trong chất nền hóa học cho thấy sự hiện diện của một kháng thể đặc biệt trong mẫu huyết thanh. Xét nghiệm ELISA trực tiếp chỉ sử dụng một kháng thể chính liên kết với enzyme. Khi liên kết với kháng nguyên, nó nhanh chóng thay đổi màu sắc, cho thấy sự hiện diện của tác nhân truyền nhiễm trong máu. Tuy nhiên, cường độ của các tín hiệu yếu hơn trong ELISA trực tiếp do các epitopes bị giới hạn trong sự ràng buộc của các kháng nguyên. Do đó, ELISA trực tiếp ít nhạy cảm hơn so với ELISA gián tiếp.

Hình 01: Kiểm tra ELISA trực tiếp

ELISA gián tiếp là gì?

ELISA có thể được thực hiện bằng hai loại kháng thể là; kháng thể sơ cấp và kháng thể thứ cấp. Công cụ ELISA gián tiếp sử dụng cả hai loại kháng thể để khuếch đại tín hiệu để phát hiện tốt hơn. Kỹ thuật ELISA gián tiếp được thực hiện như sau.

1. Các tấm được ủ với các kháng nguyên và được rửa để chặn liên kết không đặc hiệu.
2. Sau đó, các kháng thể chính được thêm vào và rửa sạch.
3. Kháng thể thứ cấp liên kết với enzyme được thêm vào và rửa sạch.
4. Một chất nền được thêm vào và cho phép phản ứng với các enzyme.
5. Tín hiệu được phát hiện và sự hiện diện hay vắng mặt của kháng nguyên cụ thể trong mẫu được xác định.

Trong xét nghiệm ELISA gián tiếp, một số kháng thể thứ cấp có thể liên kết với một kháng thể chính duy nhất. Kháng thể thứ cấp được liên kết với các enzyme dễ dàng phân tích. Do đó, một ràng buộc có thể tạo ra tín hiệu mạnh do có nhiều hơn một tương tác. Do đó, ELISA gián tiếp nhạy hơn ELISA trực tiếp. Tuy nhiên, ELISA gián tiếp có thể tạo ra các tín hiệu không đặc hiệu do phản ứng chéo của các kháng thể thứ cấp.

Hình 02: Xét nghiệm ELISA gián tiếp

Sự khác biệt giữa ELISA trực tiếp và gián tiếp là gì?

ELISA trực tiếp và gián tiếp
ELISA trực tiếp ít nhạy cảm hơn so với ELISA gián tiếp.	ELISA gián tiếp nhạy hơn.
Mất thời gian
Xét nghiệm ELISA trực tiếp là một quá trình nhanh chóng.	ELISA gián tiếp tốn thời gian.
Sử dụng kháng thể
Chỉ có một loại kháng thể (Kháng thể chính) được sử dụng trong ELISA trực tiếp.	Kháng thể sơ cấp và thứ cấp được sử dụng cho ELISA gián tiếp.
Liên kết với Enzyme
Kháng thể chính được liên kết với enzyme.	Kháng thể thứ cấp được liên kết với enzyme.
Phản ứng chéo của kháng thể thứ hai
ELISA trực tiếp loại bỏ phản ứng chéo của kháng thể thứ hai.	ELISA gián tiếp bị ảnh hưởng với phản ứng chéo của kháng thể thứ hai.
Tín hiệu
Tín hiệu yếu so với ELISA gián tiếp.	Tín hiệu được khuếch đại trong ELISA gián tiếp. Do đó, rất dễ phát hiện.

Tóm tắt - ELISA trực tiếp và gián tiếp

ELISA là một kỹ thuật sinh hóa được sử dụng chủ yếu trong miễn dịch học để phát hiện sự hiện diện của kháng thể hoặc kháng nguyên trong mẫu máu của bệnh nhân. Nó có thể được thực hiện thông qua hai quá trình được gọi là ELISA trực tiếp hoặc gián tiếp. Xét nghiệm ELISA trực tiếp chỉ sử dụng kháng thể chính để phát hiện kháng nguyên trong khi ELISA gián tiếp sử dụng cả kháng thể chính và phụ. Trong ELISA trực tiếp, kháng thể chính được dán nhãn trong khi kháng thể thứ cấp ELISA gián tiếp được dán nhãn. Đây là sự khác biệt giữa ELISA trực tiếp và gián tiếp.

Người giới thiệu
1. Thử nghiệm Xét nghiệm miễn dịch liên kết với enzyme (ELISA). Bản tin của Tổ chức Y tế Thế giới. Thư viện Y khoa Quốc gia Hoa Kỳ, 1976. Web. 29 tháng 3 năm 2017
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen và J. Van Der Veen. Xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme Enzyme sử dụng kháng nguyên có nhãn để phát hiện kháng thể immunoglobulin M và A trong bệnh toxoplasmosis: so sánh với xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp và xét nghiệm miễn dịch liên kết với enzyme sandwich kép. Tạp chí Vi sinh lâm sàng. Thư viện Y khoa Quốc gia Hoa Kỳ, tháng 6 năm 1983. Web. 29 tháng 3 năm 2017

Hình ảnh lịch sự:
1. Sơ đồ ELISA của Viking By Cavitri - Công việc riêng (CC BY 3.0) qua Commons Wikimedia 
2. ELISA gián tiếp ELISA bởi Cawang - Công việc riêng (Muff) qua Commons Wikimedia