Sự khác biệt giữa PCR và PCR thời gian thực

PCR so với PCR thời gian thực

Phản ứng chuỗi PCR hoặc polymerase là một khám phá mang tính cách mạng trong sinh học phân tử hiện đại, lần đầu tiên được phát triển bởi nhà hóa học Kary Mullis vào năm 1983. Nó cho phép một chuỗi đơn trong một DNA phức tạp được khuếch đại để phân tích. Ý tưởng cơ bản của PCR là hai mồi, bổ sung cho các chuỗi đối diện của chuỗi DNA, được định hướng về nhau; các mồi tạo ra các chuỗi bổ sung, mỗi chuỗi chứa các mồi khác. Do đó, kết quả là một lượng lớn chuỗi tương ứng với DNA nằm giữa hai mồi. Enzyme DNA polymerase được sử dụng để mở rộng các mồi trong PCR. DNA polymerase là một enzyme ổn định nhiệt và nó có khả năng tồn tại ở nhiệt độ cao (94 đến 95 ° C) được sử dụng để làm biến tính DNA mẫu.

PCR bao gồm ba bước, cụ thể là lặp lại các vòng biến tính, ủ các mồi và tổng hợp DNA. Một máy điều nhiệt được sử dụng để thực hiện phản ứng này để có thể lập trình để thay đổi nhiệt độ nhanh chóng và chính xác. Các ứng dụng của PCR là điều tra hình sự, dấu vân tay DNA, phát hiện mầm bệnh và phân tích DNA của loài người sớm.

PCR thông thường là gì?

Có ba giai đoạn chính của PCR thông thường, đó là; Giai đoạn khuếch đại DNA, tách PCR và phát hiện sản phẩm. Việc tách các đoạn DNA thường được thực hiện bằng phương pháp điện di trên gel agarose. Các sản phẩm sau đó được nhuộm bằng etheiduim bromide. Cuối cùng, phát hiện đạt được bằng cách trực quan hóa các dải lên gel dưới ánh sáng tia cực tím. Do đó, kết quả cuối cùng của PCR thông thường không được biểu thị bằng số. Thông thường PCR thông thường chỉ có thể phát hiện một tham số duy nhất.

PCR thời gian thực là gì?

PCR thời gian thực có thể phát hiện sự khuếch đại của sản phẩm, khi các sản phẩm được tổng hợp. Với sự phát triển của công nghệ, PCR đã trở thành một kỹ thuật rất phổ biến, đặc biệt là phát hiện và xác định vi khuẩn trong thực phẩm. PCR thời gian thực sử dụng hệ thống nhuộm huỳnh quang và máy điều nhiệt có trang bị khả năng phát hiện huỳnh quang.

Sự khác biệt giữa PCR thông thường và PCR thời gian thực?

• PCR thông thường tốn nhiều thời gian hơn vì nó sử dụng điện di gel để phân tích các sản phẩm PCR khuếch đại. Ngược lại, PCR thời gian thực ít tốn thời gian hơn vì nó có thể phát hiện các khuếch đại trong các giai đoạn đầu của phản ứng.

• PCR thời gian thực thu thập dữ liệu ở giai đoạn tăng trưởng theo cấp số nhân của PCR trong khi PCR truyền thống thu thập dữ liệu tại Điểm cuối của phản ứng.

• Kết quả điểm cuối của PCR thông thường có thể không chính xác lắm, nhưng kết quả của PCR thời gian thực là rất chính xác.

• PCR thời gian thực nhạy hơn so với PCR thông thường.

• PCR thông thường có độ phân giải rất kém trong khi PCR thời gian thực có thể phát hiện rất ít thay đổi do độ phân giải cao.

• Phát hiện điểm cuối của PCR thông thường có dải động ngắn trong khi phát hiện PCR thời gian thực có dải động rộng.

• Không giống như PCR thông thường, các kỹ thuật phát hiện tự động được tìm thấy trong PCR thời gian thực.

• PCR thông thường rất phức tạp và tốn nhiều công sức hơn so với PCR thời gian thực.

• Không giống như PCR thời gian thực, PCR thông thường có thể phân biệt giữa vi khuẩn chết và vi khuẩn sống.

• PCR thời gian thực sử dụng hệ thống nhuộm huỳnh quang để phát hiện các sản phẩm trong khi PCR thông thường sử dụng ethidium bromide và tia UV để hiển thị các dải trong môi trường gel agarose.