Sự khác biệt giữa Trang SDS và Trang gốc

Sự khác biệt chính - Trang SDS so với bản địa Trang
 

SDS và trang gốc là hai loại kỹ thuật điện di gel polyacrylamide được sử dụng trong Sinh học phân tử. Các sự khác biệt chính giữa Trang SDS và Trang gốc là loại gel polyacrylamide được sử dụng. Do đó, trong Trang SDS, gel biến tính được sử dụng, các phân tử được phân tách dựa trên trọng lượng phân tử của chúng. Ngược lại, trong Trang gốc, gel không biến tính được sử dụng. Do đó, các phân tử được phân tách dựa trên kích thước, điện tích và hình dạng của chúng.

Polyacrylamide Gel Electrophoresis (Trang) sử dụng một loại gel được tạo ra bằng cách trùng hợp các monome acrylamide với methylene bisacrylamide. Polyacrylamide cứng hơn và ổn định nhiệt hơn agarose. Các gel polyacrylamide có kích thước lỗ nhỏ hơn cho phép phân tách protein hiệu quả. Có hai loại thiết lập Trang chính là Trang SDS và Trang gốc. Trang SDS hoặc Điện di gel natri-Dodecyl Sulfate Polyacrylamide tách protein dựa trên trọng lượng phân tử của chúng. Gel biến tính được sử dụng trong Trang SDS. Trang gốc sử dụng gel không biến tính và tách protein dựa trên kích thước, điện tích và hình dạng của chúng (hình dạng 3D).

NỘI DUNG

1. Tổng quan và sự khác biệt chính
2. Trang SDS là gì
3. Trang gốc là gì
4. Điểm tương đồng giữa Trang SDS và Trang gốc
5. So sánh cạnh nhau - Trang SDS so với trang gốc ở dạng bảng
6. Tóm tắt

Trang SDS là gì?

Trang SDS là kỹ thuật điện di phổ biến nhất được sử dụng để tách protein dựa trên trọng lượng phân tử của chúng. Gel được tạo ra bằng cách thêm SDS (Sodium dodecyl sulfate), đây là chất tẩy rửa. SDS răng giả protein thành monome. SDS là chất tẩy rửa anion. Do đó, nó bổ sung một điện tích âm cho các protein trong phạm vi pH rộng. Khi điện tích âm được truyền vào các phân tử protein, do sự biến đổi điện tích, các cấu trúc phức tạp bị phá vỡ. Do điện tích âm, protein thu hút về phía cực dương. Do đó, các phân tử có trọng lượng phân tử thấp hơn di chuyển nhanh hơn trên ma trận gel và có thể được quan sát gần cực dương, trong khi các protein có trọng lượng phân tử cao hơn được quan sát gần hơn với các giếng.

Hình 01: Trang SDS

Liên kết SDS với chuỗi polypeptide tỷ lệ thuận với khối lượng phân tử tương đối của nó. Do đó, khối lượng phân tử cũng có thể được xác định thông qua Trang SDS. Việc nhuộm các gel Trang SDS được thực hiện bằng nhuộm màu xanh bromophenol. Các ứng dụng của phạm vi trang SDS đến một phạm vi lớn hơn, nơi nó có thể được sử dụng để ước tính khối lượng phân tử tương đối và để xác định sự phong phú tương đối của protein trong hỗn hợp protein. Trang SDS cũng có thể được sử dụng để xác định phân phối protein trong hỗn hợp protein. Trang SDS cũng được áp dụng để tinh chế và đánh giá protein. Nó được sử dụng như một thủ tục sơ bộ để làm mờ và lai hóa phương Tây, lần lượt được sử dụng để lập bản đồ và nhận dạng protein.

Trang gốc là gì?

Điện di gel Polyacrylamide bản địa (Trang gốc) sử dụng gel không biến tính. Do đó, SDS hoặc bất kỳ tác nhân biến tính nào khác không được thêm vào ma trận gel. Trong Trang gốc, việc tách protein dựa trên điện tích và kích thước của protein. Do đó, tính di động của protein phụ thuộc vào điện tích và kích thước của protein.

Điện tích của protein phụ thuộc vào chuỗi bên của các axit amin. Nếu các chuỗi bên được tích điện âm, protein sẽ nhận được điện tích âm tổng thể và ngược lại. Protein giữ lại một hình dạng 3D do sự gấp lại diễn ra. Kết quả gấp từ một số loại liên kết trong protein như liên kết disulfide, tương tác kỵ nước và liên kết hydro. Do đó, nếu Trang bản địa được mang ở độ pH trung tính, các protein sẽ được tách ra theo hình dạng phân tử của protein. Do đó, Trang gốc có thể được sử dụng như một kỹ thuật nhạy cảm để phát hiện sự thay đổi điện tích hoặc cấu tạo của protein.

Ưu điểm chính của Trang gốc là protein được sử dụng để phân tích Trang có thể được phục hồi ở trạng thái ban đầu sau khi phân tích Trang, vì protein không bị xáo trộn trong quá trình. Trang gốc là một kỹ thuật thông lượng tương đối cao và độ ổn định của protein được tăng lên.

Hình 02: Trang gốc

Sau khi hoàn thành quá trình chạy gel, có thể xem gel Trang gốc bằng cách nhuộm với màu xanh bromophenol hoặc bất kỳ thuốc thử nhuộm phù hợp nào khác. Các ứng dụng của Trang gốc bao gồm tách protein có tính axit bao gồm glycoprotein như erythropoietin tái tổ hợp của con người hoặc xác định protein có trong Bovine Serum Albumin (BSA).

Điểm giống nhau giữa Trang SDS và Trang gốc?

• Cả hệ thống Trang SDS và Trang gốc đều sử dụng gel polyacrylamide làm ma trận của gel.
• Cả hai đều được sử dụng để tách và xác định protein.
• Cả hai đều sử dụng di động điện di để tách các hợp chất.
• Cả hai có thể được thực hiện theo cách dọc hoặc ngang (chủ yếu được thực hiện dưới dạng thiết lập Trang dọc vì thời lượng chạy nhiều hơn).
• Thiết bị điện di bao gồm bể gel, lược, nguồn điện được yêu cầu cho hoạt động của cả hai kỹ thuật.
• Hình dung của gel có thể được thực hiện bằng phương pháp nhuộm màu trong cả hai kỹ thuật.

Sự khác biệt giữa Trang SDS và Trang gốc là gì?

Trang SDS so với Trang gốc
Trang SDS hoặc Trang Natri-dodecyl sulfate tách protein dựa trên trọng lượng phân tử của chúng và nó sử dụng gel biến tính.	Trang gốc sử dụng gel không biến tính và tách protein dựa trên kích thước, điện tích và hình dạng của chúng (hình dạng 3D).
Loại gel
Một gel biến tính được sử dụng trong trang SDS.	Một loại gel không biến tính được sử dụng trong trang gốc.
Sự hiện diện của SDS
SDS có mặt như một chất tẩy rửa để truyền tải điện tích âm lên mẫu trong trang SDS.	SDS không có trong trang gốc.
Cơ sở tách
Việc tách protein phụ thuộc vào trọng lượng phân tử của protein trong trang SDS.	Sự phân tách phụ thuộc vào kích thước và hình dạng của phân tử protein trong trang gốc.
Sự ổn định của Protein
Tính ổn định của protein thấp trong trang SDS.	Tính ổn định của protein cao trong trang gốc.
Phục hồi Protein gốc
Không thể vì nó bị biến tính trong trang SDS.	Có thể trên trang gốc.

Tóm lược - Trang SDS vs Bản địa Trang

Trang SDS và Trang gốc là hai loại kỹ thuật điện di trên gel Polyacrylamide được sử dụng để tách protein. Trang SDS được xử lý bằng chất tẩy rửa có tên SDS. SDS cung cấp một điện tích âm tổng thể cho protein, sau đó dẫn đến sự biến tính của protein. Do đó, các protein được phân tách dựa trên trọng lượng phân tử của chúng. Ngược lại, kỹ thuật Trang gốc không sử dụng bất kỳ tác nhân biến tính nào. Do đó, các protein được phân tách dựa trên kích thước hoặc hình dạng của chúng. Đây là sự khác biệt giữa trang SDS và trang gốc.

Tài liệu tham khảo:

1. Nguyên tắc và phương pháp điện di gel Polyacrylamide (SDS-PAGE). Nguyên lý và phương pháp điện di gel Polyacrylamide (SDS-PAGE) | MBL Life Sience -ASIA-. Có sẵn ở đây
2. Gel bản địa. Phòng thí nghiệm Protein Liên minh | Dịch vụ đặc trưng sinh lý. Có sẵn ở đây  

Hình ảnh lịch sự:

1.'SDS-PAGE Electrophoresis'By Bensaccount tại Wikipedia tiếng Anh, (CC BY 3.0) qua Commons Wikimedia  
2. Tải một mẫu vào điện di trên gel polyacrylamide'By Blaz Nemec từ Ljubljana, Slovenia (CC BY-SA 2.0) qua Commons Wikimedia